本发明涉及药物检测技术领域，具体涉及一种盐酸右美托咪定原料或制剂中有关物质的检测方法。
背景技术：
Dexmedetomidine hydrochloride 是一种高度选择性的 α2 受体激动剂。它具有镇静、催眠和抗焦虑作用，以及镇痛和交感神经阻滞作用。它是一种有效的镇静、镇痛、麻醉辅助药物。它提供了一种独特的镇静类型，即“保意识镇静”，可减少术中麻醉和镇痛的剂量，有效抑制围麻醉期的应激状态，改善患者的血流动力学，且无明显呼吸抑制。它还可以预防术后恶心、呕吐和寒战，对神经、心脏和肾脏保护具有潜在的益处。盐酸右美托咪定最早由美国雅培公司和芬兰Orion公司研制成功。
在我国，盐酸右美托咪定原料或制剂尚无国家标准，有关物质的检测方法也没有统一的标准。目前大多参考USP40、相关专利和文献报道。经过比较，流动相中有关物质的检测方法大多不同。如美国药典USP40，流动相为缓冲盐（0.89g/l磷酸氢二钠约900ml，用16g/l磷酸二氢钠调pH至7.0，稀释至1000ml）和甲醇的重量比为40:60，由于usp40中的杂质谱与盐酸右美托咪定原料或制剂中的杂质谱不同，
相关文献报道了“HPLC法测定盐酸右美托咪定有关物质”，使用流动相a：乙腈-磷酸盐缓冲液（取磷酸二氢钾4.08g，放入1000ml水中，加三乙胺2ml）=20：80 ，流动相b：乙腈-磷酸盐缓冲液（取4.08g磷酸二氢钾，放入1000ml水中，加入2ml三乙胺）=80:20，磷酸盐缓冲液浓度高导致色谱柱耐受同时流动相a、b为混合溶液，制备较为复杂。
专利2016103410755公开了一种测定盐酸右美托咪定原料药中有关物质含量的方法，流动相a为：0.04-0.06mol/l的磷酸二氢钾溶液，流动相b为：乙腈；专利2016107910596公开了一种盐酸右美托咪定原料或制剂中有关物质的检测方法，同样采用磷酸盐缓冲液和乙腈作为流动相a、b，磷酸盐缓冲液是取磷酸氢二铵2.64g，加水溶解并稀释至1000ml，用磷酸调节pH至7.3。以上两项专利技术使用单一有机相和水相直接混合两种流动相。由于极性不同，溶解不完全，混合不均匀，使噪音过大，
技术实施要素：
为了解决上述背景技术中的技术问题，本发明提供了一种分离度好、操作简单、灵敏度高、能有效检测相关物质的盐酸右美托咪定原料或制剂相关物质的检测方法。
本发明解决上述技术问题的技术方案如下：一种盐酸右美托咪定原料或制剂中有关物质的检测方法，该有关物质为式1-式5所示化合物，其为分别为杂质c、杂质d、杂质e、杂质f和杂质g，其化学名称和结构式如下：
杂质c
杂质d
杂质e
杂质 f
杂质克
待检测的盐酸右美托咪定在36-38℃的充氮储存瓶中静置20-30min，然后用高效液相色谱法检测，检测波长为215-220nm，柱子是215-220nm。温度30-40℃，十八烷基硅烷键合硅胶为填料，乙腈-磷酸盐缓冲液为流动相a，乙腈为流动相b，梯度混合器之间安装捕集阱和喷油器。如下设置墨盒并执行梯度洗脱：
本发明的有益效果是：在本发明中，将待测盐酸右美托咪定置于充氮贮藏瓶中，温度36-38℃，静置20-30min。在与空气隔绝的氮气状态下，让其在合适的温度下静置一定时间。预处理后的盐酸右美托咪定能很好地保持其稳定性，对盐酸右美托咪定起到保护作用。测试中的杂质不受干扰，提高了测试结果的稳定性。使用乙腈-磷酸盐缓冲液作为流动相a，乙腈作为流动相b，避免了高效液相色谱仪中单一的有机相和水相混合，出现微晶沉淀的问题，导致设备磨损。基线噪声较大，检测限和定量限也增加，导致检测灵敏度下降。本发明采用的方法分离度好，灵敏度高。同时在进样器前安装了捕集柱。捕集柱安装在梯度混合器和进样器之间，可以有效吸附去除流动相中的杂质，也可以去除管道和混合。可以去除装置中的杂质，使产品检测的色谱基线稳定，提高准确度。在上述技术方案的基础上，本发明还可以进行如下改进。并且检测限和定量限也增加，导致检测灵敏度下降。本发明采用的方法分离度好，灵敏度高。同时在进样器前安装了捕集柱。捕集柱安装在梯度混合器和进样器之间，可以有效吸附去除流动相中的杂质，也可以去除管道和混合。可以去除装置中的杂质，使产品检测的色谱基线稳定，提高准确度。在上述技术方案的基础上，本发明还可以进行如下改进。并且检测限和定量限也增加，导致检测灵敏度下降。本发明采用的方法分离度好，灵敏度高。同时在进样器前安装了捕集柱。捕集柱安装在梯度混合器和进样器之间，可以有效吸附去除流动相中的杂质，也可以去除管道和混合。可以去除装置中的杂质，使产品检测的色谱基线稳定，提高准确度。在上述技术方案的基础上，本发明还可以进行如下改进。本发明采用的方法分离度好，灵敏度高。同时在进样器前安装了捕集柱。捕集柱安装在梯度混合器和进样器之间，可以有效吸附去除流动相中的杂质，也可以去除管道和混合。可以去除装置中的杂质，使产品检测的色谱基线稳定，提高准确度。在上述技术方案的基础上，本发明还可以进行如下改进。本发明采用的方法分离度好，灵敏度高。同时在进样器前安装了捕集柱。捕集柱安装在梯度混合器和进样器之间，可以有效吸附去除流动相中的杂质，也可以去除管道和混合。可以去除装置中的杂质，使产品检测的色谱基线稳定，提高准确度。在上述技术方案的基础上，本发明还可以进行如下改进。可有效吸附去除流动相中的杂质，也可去除管路和混合。可以去除装置中的杂质，使产品检测的色谱基线稳定，提高准确度。在上述技术方案的基础上，本发明还可以进行如下改进。可有效吸附去除流动相中的杂质，也可去除管路和混合。可以去除装置中的杂质，使产品检测的色谱基线稳定，提高准确度。在上述技术方案的基础上，本发明还可以进行如下改进。
进一步地，乙腈-磷酸盐缓冲液取0.01-0.02mol/l磷酸二氢钾，乙腈与磷酸二氢钾的体积比为20:80，用三乙胺调节pH至6.5-7.0。
采用上述进一步方案的有益效果是乙腈-磷酸盐缓冲液采用上述含量和浓度，使其处于上述pH范围内，从而可以获得更好、更准确的检测结果。
进一步地，乙腈-磷酸盐缓冲液是取0.02mol/l磷酸二氢钾，乙腈与磷酸二氢钾的体积比为20:80，用三乙胺调节pH至6.9。
采用上述进一步方案的有益效果是，上述内容可以获得更好的检测效果，提高检测精度。
另外，检测波长为220nm，柱温为35℃，流速为1ml/min。
采用上述进一步方案的有益效果是上述波长、柱温和流速能够更好地提供良好的检测环境。
进一步地，按照下表进行梯度洗脱：
采用上述进一步方案的有益效果是流动相a和流动相b的精确体积百分比可以得到分离度较好的色谱图，即盐酸右美托咪定原料的检测和本发明制剂的有关物质。提供良好的实验测试结果。
本发明能很好地将盐酸右美托咪定与其他非活性物质分离，并能准确测定其杂质含量，本发明的检测方法可将盐酸右美托咪定与其最难分离的氧化物质分离。降解产物分离良好，主峰峰纯度符合要求，难洗脱的杂质峰也能快速洗脱。本发明的检测方法可用于盐酸右美托咪定原料或制剂的质量。控制。为产品的质量控制和统一标准的建立提供了良好的推动力。
图纸说明
[0020] 图1是使用本发明检测方法的杂质c的色谱图；
图2是使用本发明检测方法的杂质d的色谱图；
图3是使用本发明检测方法的杂质e的色谱图；
图4是使用本发明检测方法的杂质f的色谱图；
图5是使用本发明检测方法的杂质g的色谱图；
图6为本发明使用检测方法的盐酸右美托咪定对照品的色谱图；
图7是盐酸右美托咪定及其杂质c、d、e、f、g混合后注射液使用本发明检测方法的色谱图；
[0020] 图8为背景技术中使用usp40检测方法的色谱图；
[0020] 图9为使用背景技术中的usp40检测方法检测盐酸右美托咪定(中间体1)的色谱图；
图10是使用本发明的检测方法检测盐酸右美托咪定(中间体1)的色谱图；
图11在后台技术中使用相关文献中方法的色谱图进行检测；
图12是使用专利2016103410755的检测方法的色谱图（由于基线噪声需要放大观察，所以色谱图只包括基线部分）；
图13为本发明检测方法的色谱图（由于基线噪声需要放大观察纵坐标，所以色谱图只包括基线部分）；
图14为本发明检测方法的色谱图（未安装捕集柱）；
图15是使用本发明检测方法的色谱图（安装了捕集盒）。
ret.time：保留时间，height：高度，area：峰面积，rel.area：峰面积百分比，resol：分离度，asy：拖尾因子，plates：理论塔板数
详细方法
下面结合附图对本发明的原理和特征进行说明。实施例仅用于解释本发明，并不用于限制本发明的范围。
实施例1，
如图1-7所示，在加入盐酸右美托咪定对照溶液后，将各盐酸右美托咪定和盐酸右美托咪定的杂质定位液（c、d、e、f、g）与各杂质溶液分别进行检测，待检测的盐酸右美托咪定在36℃的充氮储存瓶中静置30min，然后用高效液相色谱法检测，均采用相同的液相色谱法。方法条件：以十八烷基硅烷键合硅胶为填料；使用乙腈-磷酸盐缓冲液（取 0.02mol/l 磷酸二氢钾，用三乙胺调 pH 至 6.9）为（20:80，v/v）流动相 a，乙腈为流动相 b，检测波长为 220nm，柱温为35°C，流速为 1ml/min，填充柱内径3.9mm，柱长20cm，进样器前装有捕集阱。收集小柱，所述捕集小柱采用ghost-bustercolumn，规格尺寸采用长度为4.6mm，直径为50mm，均按照下表进行梯度洗脱(v/v)：
测试结果见表1，谱图见图1-7。
表格1
结论：盐酸右美托咪定峰与各杂质对照品峰和各杂质对照品峰的分离度均大于1.5，满足相关物质的检测要求，说明本发明检测结果准确。 .
实施例2，
如图8所示，采用美国药典usp40的方法检测盐酸右美托咪定原料或制剂有关物质，采用高效液相色谱法。填充剂，使用磷酸盐缓冲液（0.89g/l磷酸氢二钠约900ml，用16g/l磷酸二氢钠调pH至7.0，稀释至1000ml）-甲醇=40:60为流动相，检测波长220nm，柱温为 30 °C，流速为 1.0 ml/min。填充柱内径为4.6 mm，柱长为10 cm。
色谱图结果见图8。 图中可以清楚地看到试样横坐标中的主峰（10.568min）和相邻的杂质峰（11.465min）没有分离，有明显的夹杂物的杂质。这种检测方法的分离度不能满足要求。
比较了USP40相关物质检测方法与本发明专利相关物质检测方法对杂质的检测能力。本发明的检测步骤和条件与实施例1相同，USP40相关物质检测方法在背景技术中有所描述。USP40的检测方法相同，结果见表2，色谱图分别见图9和图10。
表 2
从图8和表2可以看出：在USP usp40方法中，主峰和杂质c不能达到基线分离，因为是等度法，杂质检测能力比专利法相对弱；专利方法采用梯度法，杂质c与主峰的分离度大于1.5，满足检测要求。从分辨率和杂质检测能力的结果来看，专利方法优于usp40方法。
实施例3，
如图11所示，采用文献方法检测盐酸右美托咪定原料或制剂有关物质，采用高效液相色谱，液相色谱条件：以十八烷基硅烷键合硅胶为填料，取0.03mol/l磷酸盐缓冲液（称取4.08g磷酸二氢钾，加水1000ml溶解，加三乙胺2ml）：乙腈（80：20）为流动相a，磷酸盐缓冲液：乙腈（20：80）为流动相b，检测波长为220 nm，柱温为 35°C，流速为 1.0 ml/min。根据下表进行梯度洗脱（v/v）：
色谱图结果如图11所示。该方法检测到的样品是破损样品，因此色谱柱有很多杂质峰。从图可以看出。由图11可知，杂质峰的分离度不如本发明。而且在实际操作过程中，由于0.03mol/l磷酸盐缓冲液的浓度较大，对色谱柱的损伤也较大，缩短了色谱柱的使用寿命，增加了实验成本，流动相a和b是混合溶液，制备比较复杂。
实施例4，
利用专利2016103410755的背景技术，对盐酸右美托咪定原料或制剂相关物质进行检测，采用高效液相色谱，液相色谱条件：十八烷基硅烷键合硅胶为填料；磷酸盐缓冲液（取0.02mol/l磷酸二氢钾，用三乙胺调pH至6.9）为流动相a，乙腈为流动相b，检测波长220nm，柱温35℃，流速为1.0 毫升/分钟。根据下表进行梯度洗脱（v/v）：
色谱图结果见图12。从图中可以清楚地看出，当单一有机相和水相在高效液相色谱仪中混合时，会有少量晶体析出，会导致设备磨损和撕裂。色谱图中的基线噪声比较大，检测限和定量限也增加，最终导致检测灵敏度下降。与图相比。使用本发明的检测方法从图13可以清楚地看出，色谱图中的基线噪声较大。
本发明的方法是将待检测的盐酸右美托咪定在36℃的充氮储存瓶中静置30min，然后用高效液相色谱法检测。液相色谱条件如下：十八烷基硅烷键合硅胶为填料；乙腈-磷酸盐缓冲液（取0.02mol/l磷酸二氢钾，用三乙胺调pH至6.9）为（20:80，v/v）流动相a，乙腈为流动相b，检测波长为220 nm，色谱柱温度35℃，流速1.0ml/min，进样器前安装捕集柱，捕集柱采用ghost-bustercolumn尺寸为长4.6mm，直径50mm。根据下表进行梯度洗脱（v/v）：
得到的色谱图如图 13 所示。
实施例5，
对盐酸右美托咪定原料或制剂有关物质的检测，将待检测的盐酸右美托咪定在充氮的储存瓶中于36℃静置30分钟，然后用高效液进行色谱法。检测、液相色谱条件：以十八烷基硅烷键合硅胶为填料；使用乙腈-磷酸盐缓冲液（取 0.02mol/l 磷酸二氢钾，用三乙胺调 pH 至 6.9）为（20:80，v/v）流动相 a，乙腈为流动相 b，检测波长为 220 nm，柱温在 35°C，流速为 1 ml/min。根据下表进行梯度洗脱（v/v）：
色谱图结果如图14所示。图中可以清楚地看到横坐标上流动相梯度从55分钟变为80分钟时，基线上有很多毛刺，影响了杂质的判断峰。因此，本发明的方法也用于不安装捕集柱的检测，对检测结果影响较大，不利于检测的准确性和稳定性。
实施例6，
本发明的方法用于检测盐酸右美托咪定原料或制剂有关物质，待检测的盐酸右美托咪定在充氮的储存瓶中36℃静置30分钟C、液相色谱法检测，液相色谱条件：以十八烷基硅烷键合硅胶为填料；使用乙腈-磷酸盐缓冲液（取0.02mol/l磷酸二氢钾，用三乙胺调节ph至6.9）为（20:80，v/v）流动相a，乙腈为流动相b，检测波长为220 nm，柱温35℃，流速1ml/min，进样口前安装捕集阱。收集小柱，所述捕获小柱采用ghost-bustercolumn，
色谱图结果如图 15 所示。从图中可以清楚地看到，安装捕集小柱后，光谱基线稳定。
以上所述仅为本发明的较佳实施例而已，并不用于限制本发明。凡在本发明的精神和原则之内，所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围内。范围内。
